MétroPol Allergènes M-441

Substances

Informations générales

Propriétés physico-chimiques

Plus d'informations

Familles de substances

• ALLERGENES

Principe et informations

Principe de prélèvement et d'analyse

• État physique

  Solide

• Type de prélèvements

  Produit massif

• Technique analytique

  CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE ULTRA HAUTE PERFORMANCE

• Injecteur

  PASSEUR AUTOMATIQUE

• Détecteur

  SPECTROMETRE MS/MS

Domaine d'application

Aucun domaine d'application défini.

Réactifs

• ACETONE
• ACETONITRILE
• ACIDE ACETIQUE
• EAU ULTRAPURE
• METHANOL
• SULFATE DE ZINC
• THF

Consignes de sécurité pour les manipulations en laboratoire

Méthode d'analyse

Préparation d'analyse

• Commentaires sur les étapes

  • Découpe du gant
  • Mise en solution de l'échantillon
  • Extraction des allergènes aux ultra-sons
  • Filtration de la solution extraite avant analyse

• Conditions de conservation échantillon préparé avant analyse

  L'analyse doit être immédiate.

3 étapes de préparation :

Étape de préparation N°1

• Type de préparation

  Découpe

• Commentaires

  Découper le gant en morceaux de 2 à 3 mm, puis en peser une masse m = 0,5 g.

Étape de préparation N°2

• Solvant ou solution

  • METHANOL

• Type de préparation

  Mise en solution

• Volume

  5 mL

• Commentaires

  Pour quelques allergènes, le solvant de la solution mère est différent. Voir les données de validation.

Étape de préparation N°3

• Type de préparation

  Extraction

• Commentaires

  L'extraction se fait aux ultra-sons pendant 15 minutes à température ambiante.

  Filtrer ensuite une partie aliquote sur un filtre en PTFE de 0,2 µm. Transférer dans un un flacon de 2 mL pour l'injection.

Une condition analytique :

Condition analytique N°1

• Technique analytique

  • CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE ULTRA HAUTE PERFORMANCE

• Injecteur

  • PASSEUR AUTOMATIQUE

• Colonne

  • En PEEK
  • PHASE INVERSE

• Détecteur

  • SPECTROMETRE MS/MS

• Phase mobile

  • ACETONITRILE
  • ACIDE ACETIQUE
  • EAU TAMPONNEE
  • SULFATE DE ZINC

• Commentaires, conseils ou condition particulières

  Le protocole repose sur la comparaison du résultat d’analyse de la solution extraite, aux résultats obtenus pour l'étalon préparé pour chacune des substances recherchées.
  Le protocole,  schématisé ci-dessous, comprend globalement une extraction à l’aide de méthanol, l’injection dans le système UHPLC-MS/MS de la solution extraite et son analyse dans 7 jeux de conditions optimisées. L'analyse des substances pures (étalons analytiques) est effectuée au cours du même essai, dans les conditions optimisées pour chaque allergène. Ces conditions sont détaillées dans les données de validation.

  • Injections des 11 mélanges étalons stabilisés (chacun contenant plusieurs des 43 substances recherchées associées de façon à ce qu'elles ne réagissent pas entre elles) successivement dans les conditions MS/MS optimisées pour les allergènes concernés.
  • Injections systématiques de l’extrait dans chacune des conditions MS/MS 1 à 7 optimisées (pour les différentes familles d’allergènes).

  La composition de ces mélanges et les conditions d’analyse (MS/MS 1 à 7) recommandées pour chaque mélange étalon sont décrites dans les données de validation.

   

  

   

Étalonnage et expression des résultats

• Principe d'étalonnage

  externe

• Commentaires

  Préparation d'une solution mère (environ 2,5 mg/mL) de chaque substance pure dans un solvant adapté *;

  Dilution dans le méthanol (ou un solvant plus adapté*) : solution fille d'un allergène seul.

  Mélange des solutions-filles : mélanges étalons stabilisés.

  Analyse de l'échantillon et des étalons dans des conditions strictement identiques*.

  * Les conditions opératoires optimisées, les solvants recommandés et la composition des mélanges étalons stabilisés, sont indiqués dans les données de validation.

  Exemple fourni pour le bis-dibutyldithiocarbamate de zinc (ZDBC)

  Masse mono-isotopique = 474 g/mol

  Mode de détection ES+

  Ion parent : m/z=471

  Ion fils : m/z = 116, m/z = 172 et m/z = 268.

   

  La fenêtre TargetLynx® de fin d’analyse du ZDBC est la suivante

  

   

  La transition 471>172 est la transition de détection et de quantification,

  Les transitions 471>116 et 471>268 sont des transitions de confirmation.

  A_471>172 est l’aire du pic pour la transition 471>172,

  A_471>116 est l’aire du pic pour la transition 471>116,

  A_471>268 est l’aire du pic pour la transition 471>268,

   

   

  La confirmation de l’identité de l’allergène dans l’extrait nécessite la comparaison des ratios de réponse pour chaque transition avec ceux obtenus pour la substance pure analysée dans les mêmes conditions :

   

  • les ratios attendus (obtenus pour ZDBC étalon) sont les suivants :

  
  

  

  • les ratios calculés pour le ZDBC dans l’échantillon confirment l’identité de la molécule extraite :

  

  

   

  • Le dosage du ZDBC en µg/g repose classiquement sur le calcul suivant :

  

  avec :

  A ech = aire du pic (pour la transition de quantification) obtenu pour l’échantillon extrait

  A ref = aire du pic (pour la transition de quantification) obtenu pour la solution-fille de référence

  C = concentration de la solution-fille de référence µg/mL

  V = volume de la solution d’extraction du gant mL

  m = masse (g) de l’échantillon gant soumis à l’extraction.

   

  Le résultat de la recherche peut être fourni

  •  sous la forme d’un tableau détaillé présentant pour un gant donné, les allergènes identifiés en laboratoire et leur teneur respective ramenée au gant échantillon :

  

  • sous la forme de données synthétisées :

  

  • sous la forme d'un histogramme où les allergènes en faible concentration n'apparaissent pas, compte tenu des écarts entre les concentrations respectives :

  

  • sous la forme d'un histogramme groupé, plus visuel, avec des données de type logarithmique, qui permet de faire apparaitre l'ensemble des molécules détectées :

  

   

Historique

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